· polyacrylamidegel moat troch acrylamide monomer, polymerization begjinpunt materiaal, katalysator, en it rjocht fan sâlt en buffer mingsel tegearre.
· acrylamideen BIS (N, N'- methylene dûbele acrylamide) is de monomer foarm gel matrix.
· ammonium persulfate start adhesive polymerization proses. De formulearring fan de lijm fereasket 10% ammonium persulfate oplossing taret yn wetter. It grutste part fan 'e ynformaasje oanjûn in needsaak foar aktyf gebrûk. De 10% oplossing kin lykwols ferskate wiken op 4 ℃ pleatst wurde sûnder signifikant ferlies fan aktiviteit. Meitsje oant 10 ml en smyt as de lijm net slagget om te aggregearjen.
Tip: It persintaazje fanacrylamideyn sequencing lijm en protein lijm is net itselde. As jo foarôf makke acrylamide brûke: BIS-oplossing, soargje derfoar dat jo de juste flesse krije.
· TEMED (N, N, N ', N'- tetramethyl ethylenediamine) is in katalysator, yn in brune flesse, pleatst yn 'e kuolkast. Foegje krekt foardat it lijm giet.
· polyacrylamide electrophoresis brûkt glês yn electrophoresis moatte wurde wosken foar en nei eltse kear. Nei elektroforese waskje mei in sêfte boarstel en doek yn hyt sjippewetter, spielje mei destillearre wetter en stean te droegjen.
· focht en stof kinne feroarsaakje mei holle polymeer. Foardat elektroforese de glêzen plaat skjinmeitsje mei glêsreiniger en wipe it mei in sêfte boarstel. Waskje mei destillearre wetter en droech goed mei in papieren wipe. Spuljen mei 70% ethanol foardat jo mei papier wipe, helpt it droegjen skjin te meitsjen en te fersnellen. Add samples fan acrylamide opienfolgjende: BIS, wetter, buffer oplossing, ammonium persulfate, TEMED. Goed skodzje en daliks yngiet.
It is net nedich om polyacrylamide te ûntgassen foar polymerisaasje. (Acrylamide waard eartiids yn in fakuüm pleatst om bubbels te ferwiderjen, om't soerstof polymerisaasje ynhibeet.)
Horizontale lijmpunt sample tips.
· set in stik swart papier yn 'e ûnderste doaze, swarte eftergrûn om wat foarbyldgat te meitsjen om dúdliker te sjen.
· lijm tank fol buffer, krekt oer de kolloïd.
· as de râne hat in ljocht, skeakelet de ljochten, lit ljocht skine kolloïd. Tekenje it monster yn 'e pipet.
· mei help fan automatyske pipetting apparaat.
· yn 10-200 mu 1 floeibere moving punt kin brûkt wurde yn de measte punten op de stekproef. Foar heul lytse stekproefgatten (minder dan 10μ1), is de lange pipetkop dy't brûkt wurdt foar sequencen fan lijm handiger.
· pipetting krekt ûnderdompele yn de stekproef, inhaling stadich bewegende floeistof. De stekproef kin lykje kleverig mei glycerine, en flugge pompen kin lûke lucht bubbels yn de pipet holle.
· samples nei inhaling pipetting holle, sil bewege floeistof holle sêft op 'e râne fan' e piip of wiping papier sûgje floeibere kop bûten de druppels. Wês foarsichtich dat jo it monster net sûgje.
Plak it monster yn it sample gat
· pipetteerapparaat om in bytsje druk te hâlden, meitsje de samples in bytsje oerstreamende floeistofkop.
· de pipetting kop ynfoege yn de buffer, wat heger as de spot gatten, behâlde positive druk. De tip fan 'e pipet kin yn in lyts gat ynfoege wurde.
· stadich en stadich de samples út. De pipet tip wurdt pleatst boppe it punt monster gat, en de stekproef sil sinke yn it gat. Lit it stekproef sinkje om it stekproefgat te foljen ynstee fan yn te drukken.
· ienris de lêste drip fan monster mei floeibere kop, floeistof sil ferpleatse nei de twadde skonk, stadichoan ferheegje de floeibere beweging, ferpleatse út buffer
Hoe kinne jo fertikale lijm sampling dwaan?
· fertikale lijm punt sample gatten foarme tusken twa stikken glês. Yn tige tinne lijm kin de pipetkop net iens tusken twa glêzen platen ynstutsen wurde. Sjoch de glycerine! Set de pipetkop oer it stekproefgat en it stekproef sil yn it gat sinke.
· punt sample foar, wês wis te setten de fertikale punt fan polypropylene acyl gel sample gat wurdt spoeld skjin. Waskje fuort de unpolymerized acrylamide en it wetter dat kin ferskine op 'e boaiem fan' e stekproef gat. It wetter kin meitsje it monster gat oanmerklik lytser. Brûk in spuit fan 25 ml of 50 ml en in 18-gauge needle. Giet de elektroforesebuffer yn en spoel it monstergat foarsichtich.
· it kin lestich wêze om it stekproefgat te sjen, mar tagelyk is de rest maklik. As der tefolle gatten binne, kin de samplebuffer wurde hifke mei bromophenolblau.
Post tiid: Mar-31-2023