· polyakrylamidegel moat troch acrylamidemonomeer, polymerisaasje-útgongsmateriaal, katalysator, en it rjochterkant fan sâlt en buffermingsel tegearre.
· akrylamideen BIS (N,N'-methyleen dûbele acrylamide) is de monomeerfoarmige gelmatrix.
· ammoniumpersulfaat start lijmpolymerisaasjeproses. De formulearring fan 'e lijm fereasket 10% ammoniumpersulfaatoplossing taret yn wetter. De measte ynformaasje joech oan dat aktyf gebrûk nedich is. De 10% oplossing kin lykwols ferskate wiken by 4℃ pleatst wurde sûnder signifikant ferlies fan aktiviteit. Folje oan oant 10 ml en smite it fuort as de lijm net mear aggregeart.
Tip: It persintaazje fanakrylamideBy it sekwinsjearjen is lijm en proteïnelijm net itselde. As jo in foarmakke akrylamide: BIS-oplossing brûke, soargje derfoar dat jo de juste flesse krije.
· TEMED (N, N, N', N'- tetramethyl ethyleendiamine) is in katalysator, yn in brune flesse, pleatst yn 'e kuolkast. Foegje it krekt foar it jitten fan lijm ta.
· polyacrylamide-elektroforese dy't brûkt wurdt by elektroforese moat foar en nei elke kear wosken wurde. Nei elektroforese, waskje mei in sêfte boarstel en doek yn waarm sjippewetter, spielje mei destillearre wetter en lit it droegje.
· focht en stof kinne feroarsaakje mei hol polymeer. Foar elektroforese, meitsje de glêzen plaat skjin mei glêsreiniger en feie it ôf mei in sêfte boarstel. Waskje mei destillearre wetter en droegje goed ôf mei in papieren doekje. Spoelen mei 70% ethanol foardat jo ôfveegje mei papier helpt om skjin te meitsjen en it droegjen te fersnellen. Foegje achterinoar samples fan acrylamide ta: BIS, wetter, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, TEMED. Goed skodzje en fuortendaliks jitte.
It is net nedich om polyacrylamide te ûntgassen foar de polymerisaasje. (Acrylamide waard eartiids yn in fakuüm pleatst om bubbels te ferwiderjen, om't soerstof de polymerisaasje remt.)
Horizontale lijmpunt foarbyldtips.
· Doch in stik swart papier yn 'e ûnderste doaze, mei in swarte eftergrûn om in gat yn it stekproef te meitsjen, sadat it dúdliker te sjen is.
· buffer fol mei lijmtank, krekt oer it kolloïde.
· as de râne in ljocht hat, doch de ljochten oan, lit it ljocht kolloïd skine. Lûk it stekproef yn 'e pipette.
· mei help fan in automatysk pipettearapparaat.
· yn 10-200 mu 1 kin floeistofbewegingspunt brûkt wurde yn 'e measte punten op it stekproef. Foar heul lytse stekproefgatten (minder as 10μ1) is de lange pipettekop dy't brûkt wurdt foar sekwinsjelijm handiger.
· pipetterjen gewoan ûnderdompele yn it stekproef, stadich bewegende floeistof ynademe. It stekproef kin kleverich lykje mei glycerine, en rap pompen kin loftbellen yn 'e pipettekop lûke.
· Nei it ynhalearjen fan 'e pipettearkop fan 'e samples sil de floeistofkop sêft oan 'e râne fan 'e piip bewege of troch it ôfveegjen fan in papieren doek de floeistofkop bûten de drippen te sûgjen. Wês foarsichtich om it sample net te sûgjen.
Plak it stekproef yn it stekproefgat
· pipettearapparaat om in bytsje druk te hâlden, wêrtroch't de samples in bytsje bewege kinne mei de oerstreamende floeistofkop.
· de pipettekop dy't yn 'e buffer ynfoege wurdt, wat heger as de spotgatten, hâldt positive druk yn stân. De punt fan 'e pipette kin yn in lyts gat ynfoege wurde.
· stadich en wis de samples derút. De pipettepunt wurdt boppe it puntmonstergat pleatst, en it sample sil yn it gat sakje. Lit it sample sakje om it samplegat te foljen ynstee fan deryn te drukken.
· as de lêste drip fan it stekproef mei floeistofkop de floeistof nei de twadde skonk giet, stadich de floeistof omheech bringe en út 'e buffer komme
Hoe kinne jo fertikale lijmmonstering dwaan?
· fertikale lijmpuntmonstergatten foarme tusken twa stikken glês. Yn tige tinne lym kin de pipettekop net iens tusken twa glêzen platen ynfoege wurde. Pas op foar de glycerine! Set de pipettekop oer it monstergat en it monster sil yn it gat sakje.
· puntmonster foardat jo it fertikale punt fan it polypropyleen acylgel-monstergat skjinspielje. Waskje de net-polymerisearre acrylamide en it wetter dat ûnderoan it monstergat ferskine kin fuort. It wetter kin it monstergat signifikant lytser meitsje. Brûk in spuit fan 25ml of 50ml en in 18-gauge-naald. Giet de elektroforesebuffer deryn en spielje it monstergat foarsichtich ôf.
· it kin lestich wêze om it gat yn 'e stekproef te sjen, mar tagelyk is de rest maklik. As der tefolle gatten binne, kin de stekproefbuffer mei bromofenolblau test wurde.
Pleatsingstiid: 31 maart 2023